Dissertação
Título	DETECÇÃO SOROLÓGICA E MOLECULAR DO Cassava common mosaic virus EM MANDIOCA NA REGIÃO NOROESTE DO PARANÁ
Autor	Silva, Jaqueline Manzatti da
Unidade	Pós-Graduação em Genética e Melhoramento
Área de Concentração	Genética e Melhoramento
Orientador	Eliezer Rodrigues de Souto
Co-Orientador(es)	Maria de Fátima Pires da Silva Machado Claudete Aparecida Mangolin
Banca Examinadora	José Segundo Giampan Adriana Gonela
Data de Defesa	22/02/2011
Resumo	O vírus do mosaico comum da mandioca (Cassava common mosaic virus – CsCMV) é tido como o mais frequente nas áreas produtoras do centro sul do Brasil. Nessa perspectiva, o objetivo deste trabalho foi detectar e identificar o CsCMV por meio de métodos sorológicos e moleculares em plantas matrizes de mandioca, obtidas pela micropropagação in vitro, e realizar um levantamento da distribuição do vírus na região produtora de Paranavaí, no Noroeste do Paraná. O teste sorológico utilizado foi o PTA-ELISA-indireto com folhas de mandioca diluídas a 1/300, utilizando-se um antissoro policlonal específico para o CsCMV diluído a 1/10.000. Os testes sorológicos mostraram que, das 61 amostras coletadas na região produtora de Paranavaí-PR, apenas uma estava sadia. Das 20 amostras do Banco de Germoplasma da UEM, cinco estavam livres do vírus, e das 65 amostras micropropagadas in vitro, 10 se apresentaram isentas do mesmo. Através da técnica de imunocaptura (IC-RT-PCR), foram testadas folhas de mandioca diluídas a 1/10 com a IgG (2 µl/ml) purificada do antissoro para o CsCMV, seguido da reação de RT-PCR. As 16 amostras apontadas como livres de vírus pelo PTA-ELISA-indireto, foram testadas por IC-RT-PCR, e 10 se apresentaram infectadas. Das cinco plantas que apresentaram resultados negativos para o PTA-ELISA-indireto, todas mostraram resultados positivos para o IC-RT-PCR. Já das 10 plantas oriundas da micropropagação in vitro, e tidas como sadias pelo PTA-ELISA-indireto, somente cinco se mostraram livres do vírus pela IC-RT-PCR. Apenas uma das 61 amostras provenientes de Paranavaí foi confirmada como sadia pelo PTA-ELISA-indireto, como também pela IC-RT-PCR. Para confirmação da identidade do vírus detectado pelo IC-RT-PCR, foi realizada a clonagem e o sequenciamento do produto de PCR obtido em três amplificações. As sequências de nucleotídeos obtidas foram comparadas com as de outros Potexvirus depositadas no GenBank, constatando-se identidade de 87% com a sequência de uma estirpe do Cassava common mosaic virus já depositada, confirmando assim que o vírus detectado é uma estirpe do Cassava common mosaic virus.
Palavras-chave	CsCMV, PTA-ELISA-indireto, IC-RT-PCR.
Title
Abstract	The Cassava common mosaic virus (CsCMV) is considered to be more frequent in central and south of Brazil producing areas. From this perspective, the objective of this work was to detect and identify a virus in cassava plants from in vitro micropropagation, and collected in producing areas of Paranavaí, northwest of Paraná, using serological and molecular methods. Indirect-PTA-ELISA tests were used to test cassava leaves in 1/300 dilution, using a polyclonal antiserum specific for CsCMV diluted 1/10.000. From 65 samples obtained by micropropagation, 10 were healthy tested. The serological tests showed that one out of 61 samples from the producing region of Paranavaí was free of the virus. Of the 20 samples from the UEM germplasm collection, five were free of the virus. The same samples were also tested through immunocapture (IC-RT-PCR). The cassava leaves were diluted 1/10 and tested using a purified IgG specific for CsCMV. From the 16 samples identified as virus-free by indirect-PTA-ELISA, and later tested by IC-RT-PCR, 10 showed infected by the virus. Of the five plants that had presented resulted negative for the PTA-ELISA-indirect one, all had shown resulted positive for the IC-RT-PCR. Five out of 10 plants from the in vitro micropropagation were free of the virus. From 61 samples collected in Paranavaí field areas, only one was virus free as confirmed by indirect-PTA-ELISA and IC-RT-PCR. To confirm the identity of the virus detected by IC-RT-PCR, the amplified PCR products were cloned and sequenced. Comparing the obtained nucleotide sequences with those of other Potexvirus from GenBank, it was found 87% identity with a sequence of CsCMV, confirming the virus detected in this work represents a strain of Cassava common mosaic virus.
Key-words	CsCMV, IC-RT-PCR, indirect-PTA-ELISA
Arquivos	Nome Tamanho m-jmsilva.pdf 0,00 KB

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