Tese
Título	Polimorfismos moleculares da praga da cana-de-açúcar Migdolus sp. (COLEOPTERA; VESPERIDAE)
Autor	Ruiz, Juliana Bueno
Unidade	Pós-Graduação em Genética e Melhoramento
Área de Concentração	Genética e Melhoramento
Orientador	Profª Drª Maria Claudia Colla Ruvolo Takasusuki
Co-Orientador(es)	Profª DrªClaudete Aparecida Mangolin Profª Drª Maria de Fátima Pires da Silva Machado
Banca Examinadora	Profª Drª Ana Silvia Lapenta Profª Drª Maria de Fátima Pires da Silva Machado Profª Drª Eliane Gasparino Profª Drª Luciana Paes de Barros Machado
Data de Defesa	17/02/2011
Resumo	O Migdolus é um besouro da família Vesperidae, cuja fase larval prejudica o sistema radicular da cana-de-açúcar. As perdas provocadas por esse inseto podem variar de algumas toneladas de cana por hectare até, na maioria dos casos, a completa destruição da lavoura, resultando na reforma antecipada mesmo de canaviais de primeiro corte. Além das dificuldades normais de controle de qualquer praga de solo, o desconhecimento de várias fases do ciclo desse coleóptero dificulta ainda mais o seu combate. Assim, os objetivos do presente estudo foram caracterizar bioquimicamente as esterases e proteínas totais, padronizar protocolos de isolamento de DNA total e PCR de primers RAPD e verificar a variabilidade genética e estrutura de população de Migdolus sp. de quatro populações da região noroeste do Paraná. Os adultos de Migdolus sp. foram coletados em Umuarama, Cidade Gaucha, Colorado e Tapejara. As análises das isoenzimas e proteínas totais foram realizadas por meio de eletroforese PAGE e SDS-PAGE, respectivamente. O marcador RAPD foi realizado de acordo com o protocolo desenvolvido neste estudo. Em extratos de cabeça/tórax de machos foram identificadas sete esterases sendo a EST-5 denominada β-esterase e as demais esterases aβ-esterases. De acordo com a sensibilidade a inibidores, as esterases foram classificadas como: EST-1 Colinesterase I; EST-2 e EST-5 Carboxilesterases; EST-3, EST-4, EST-6 Acetilesterase e EST-7 arilesterase. Nas análises de termoestabilidade foi possível observar que a EST-7 apresentou maior termoestabilidade e a EST-2 foi a esterase mais sensível. Nos extratos de cabeça/tórax de machos foi observado maior número de peptídeos que nos extratos de fêmeas. A análise da genética de populações, utilizando marcador RAPD, permitiu verificar que há grande polimorfismo. As populações analisadas estão diferenciadas, podendo apresentar uma alta variabilidade genética ancestral. As populações de Cidade Gaúcha e Colorado foram agrupadas, bem como as populações de Umuarama e Tapejara, demonstrando que essas populações não possuem barreiras para o cruzamento entre reprodutores. Devido à alta variabilidade e pequenos valores na distância genética, esta espécie de besouro está bem adaptada à região, sendo necessário o desenvolvimento de programas de controle dessa praga.
Palavras-chave	isoenzimas, esterases, RAPD, genética de populações
Title
Abstract	Migdolus is a beetle of Vesperidae family whose larval stage damages the root system of sugar cane. The losses caused by this insect can vary from a few tons of cane per hectare up to, in most cases, the complete destruction of the crop, resulting in early retirement even sugar cane fields in addition to the first cut. Beyond the normal difficulties of any pest control soil, ignorance of the various phases of the cycle of this beetle species further complicates his match. Thus, this study aimed to biochemical characterization the esterases and total proteins, standardize protocols for isolation of total DNA and PCR primers for RAPD and verify the genetic variability and population structure of Migdolus sp. four populations from the northwestern region of Paraná. Migdolus sp. adults were collected in Umuarama, Cidade Gaucha, Colorado and Tapejara. Analyses of isozymes and total protein were performed by PAGE electrophoresis and SDS-PAGE, respectively. The RAPD was performed according to the protocol developed in this study. In extracts from head/thorax of males identified seven esterases and EST-5 called β-esterase and other esterases aβ-esterases. According to the nhibitor sensitivity ithe esterases were classified as EST-1 cholinesterase I, EST-2 and EST-5 carboxylesterases, EST-3, EST-4, EST-6 acetylesterase and EST-7 arylesterase. In the analysis of thermostability was observed that the EST-7 showed higher thermostability and EST-2 was the most sensitive esterase. In extracts of head / thorax of males were a higher number of peptides in extracts of females. The analysis of population genetics using RAPD marker, showed that there is great polymorphism. The populations analized are different, and may present a high genetic variability ancestor. The populations of Colorado City and Cidade Gaucha have been grouped as well as the populations of Umuarama and Tapejara, demonstrating that these populations have no barriers to crossing between breeders. Due to the high variability and small genetic distance values in this species of beetle is well-fitting to the region, being necessary the development of programs to control this pest.
Key-words	enzymes, esterases, RAPD, population genetics
Arquivos	Nome Tamanho d-jbruiz.pdf 0,00 KB

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