Sexta, 29 de março de 2024.
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Dissertação
Título Alterações na expressão de esterases e proteínas totais em Tetragonisca angustula L. após exposição crônica a inseticidas reguladores de crescimento.
Autor Oliveira, Carlos Vinício Prescinato
Unidade Pós-Graduação em Genética e Melhoramento
Área de Concentração Genética e Melhoramento
Orientador Maria Claudia Colla Ruvolo Takasusuki
Co-Orientador(es) Claudete Aparecida Mangolin
Erasmo Renesto
Banca Examinadora Maria Claudia Colla Ruvolo Takasusuki
Patricia Carla Giloni de Lima
Ana Silvia Lapenta
Data de Defesa 23/02/2012
Resumo As abelhas sem ferrão Tetragonisca angustula são polinizadoras de plantas nativas e cultiváveis, estando em contato com áreas contaminadas com pesticidas. Essas abelhas nativas foram avaliadas quanto a alterações da sua expressão gênica após contaminação por contato com inseticidas reguladores de crescimento (IGRs). Para o estudo utilizou-se os inseticidas Gallaxy EC 100, NatuNeem e AzaMax. Os inseticidas foram aplicados no interior dos ninhos de T. angustula localizados na Universidade Estadual de Maringá. As coletas de operárias adultas ocorreram após 48, 120, 168 horas, 30 e 60 dias. As respostas aos IGRs em nível de expressão gênica foram analisadas através de marcadores moleculares, esterases e proteínas totais. Quanto às esterases, em T. angustula observou-se o aumento da atividade relativa da EST-4 quando aplicado Gallaxy EC 100 diluído a 0,5%, NatuNeem a 2,5% e AzaMax a 1% após 60 dias, 48 horas e 60 dias, respectivamente. A inibição da atividade relativa da EST-4 foi detectada após contaminação com NatuNeem 0,5% e AzaMax 1% após 48 horas e 30 dias, respectivamente. Os IGRs analisados promoveram alterações na síntese protéica de operárias adultas de T. angustula resultando em aumento ou diminuição da intensidade relativa de coloração das bandas, além do aparecimento de novos peptídeos, comparando-se com os controles. As alterações na síntese peptídica foram identificadas após longo período de tempo de contaminação, 120 e 168 horas para Gallaxy EC 100 (6,5% e 10%), AzaMax (1% e 5%) e NatuNeem (2,5% e 100%) e 60 dias com NatuNeem 0,5%. A metodologia empregada não permitiu identificar os peptídeos que foram sintetizados, nem aqueles sofreram alterações, após a contaminação. Contudo, devido ao peso molecular de vários peptídeos estarem entre 40 e 100 kDa, estes poderiam estar relacionados com as proteínas de choque térmico (HSPs – Heat shock proteins). As HSPs podem atuar como chaperonas promovendo o reparo da conformação molecular de outras proteínas afetas por estresse, permitindo seu correto dobramento e funcionamento. A quitinase e a quitina sintetase são enzimas atuantes na renovação da quitina, mecanismo freqüente em insetos adultos que ocorre no intestino médio, pois, essa proteína compõe a membrana peritrófica. Vários genes e isoformas da quitinase já foram descritos, assim esses peptídeos detectados após a contaminação com os IGRs, poderiam estar relacionados com essas diferentes formas da quitinase. A identificação e o entendimento desses peptídeos após contaminação com IGRs poderá ocorrer com o desenvolvimento de novos bioensaios e emprego de metodologias mais acuradas para expressão gênica.
Palavras-chave Abelha sem ferrão, esterases, proteínas
Title
Abstract The stingless bees Tetragonisca angustula are pollinators of native plants and cultivated, being in contact with areas contaminated with pesticides. These native bees were evaluated for changes in gene expression after contamination by contact with insecticides growth regulators (IGRs). The study was conducted with the use of IGRs Gallaxy EC 100, Natuneen and AzaMax. The insecticides were applied to the interior of T. angustula nests located at the State University of Maringá. Sampling of adult workers occurred after 48, 120, 168 hours, 30 and 60 days. The response to the IGRs at the gene expression level was analyzed by means of molecular markers, esterase and total protein. EST-4 of T. angustula was an increase in relative activity after contamination with Gallaxy 100 EC diluted to 0.5%, 2.5% Natuneen and 1% AzaMax after 60 days, 48 hours and 60 days respectively. Inhibition of the relative activity of EST-4 was detected after contamination with the 0.5% Natuneen and 1% AzaMax after 48 hours and 30 days respectively. The IGRs promoted changes in protein synthesis of adult workers of T. angustula resulting in an increase or decrease in the relative intensity of bands, and the appearance of new peptides compared with controls. Changes in protein synthesis have been identified mainly after long period of contamination, 120 and 168 hours with the IGRs Gallaxy EC 100 (6.5% and 10%), AzaMax (1% and 5%) and Natuneen (2.5% and 100%) and 60 days with 0.5% Natuneen. The methodology used did not identify peptides that were synthesized after infection, neither have if they have changed. However, as the molecular weight of several peptides is between 40 and 100 kDa, they could be related to the heat shock proteins (HSPs). These proteins can act as chaperones, proteins that promote the repair of the molecular conformation of other proteins affected by stress, allowing their correct folding and function. The chitinase and chitin synthase are enzymes that act on the renewal of chitin, a mechanism that in an adult insect often occurs in the midgut, because this protein forms the peritrophic membrane. Several genes and chitinase isoforms have been described, so the peptides detected after infection with the IGRs could be related to these different forms of chitinase. The identification and understanding of these peptides after contamination with IGRs may be done with the development of new bioassays and use of more accurate methods for gene expression.
Key-words stingless bee, esterases, proteins
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