Dissertação
Título	Detecção de contaminação e a investigação da transmissão vertical do BmNPV (Bombyx mori nucleopolyhedrovirus) em raças do banco de germoplasma de bicho-da-seda da Universidade Estadual de Maringá
Autor	Saez , Cláudia Regina das Neves
Unidade	Pós-Graduação em Genética e Melhoramento
Área de Concentração	Genética e Melhoramento
Orientador	Profª Drª Maria Aparecida Fernandez
Co-Orientador(es)	Profª Drª Claudete Aparecida Mangolin Profª Drª Maria Claudia Colla Ruvolo Takasusuki Profª Drª Roxelle Ethienne Ferreira Munhoz
Banca Examinadora	Profª Drª Lucinéia de Fátima Chasko Ribeiro Profª Drª Adriana Gonela Profª Drª Maria Aparecida Fernandez
Data de Defesa	02/03/2012
Resumo	Neste trabalho reportamos a detecção molecular do BmNPV (Bombyx mori nucleopoliedrovírus), em raças experimentais de Bombyx mori pertencentes ao banco de germoplasma da Universidade Estadual de Maringá. Foi realizada a extração do DNA de mariposas de Bombyx mori através de metodologia de rotina, sendo que o DNA de 6 fêmeas de cada raça (B82, M11-2, M18, C36, F6, M18-2, M12-2, J1, C25, C75, C24, KR01, M11-A, AS3, B106, M8, M11, C211, E8 e Hindu), formaram pools gênicos individuais. Para obtenção dos fragmentos amplificados, foi desenhado um par de primers baseado em sequências específicas do genoma do baculovírus correspondentes à região da ORF 14 do BmNPV e, para controle, um par de primers referente a um segmento do gene da Actina A3 de B. mori. Dos vinte pools gênicos analisados, quinze apresentaram a banda de 443 pares de base, pb, que indica a presença do vírus. Somente as populações B82, M11-2, M18, C36 e F6 não apresentaram contaminação. A frequência de mariposas infectadas dentre os quinze pools gênicos detectados como contaminados foi investigada através de amplificações individuais. A frequência de mariposas contaminadas foi: 100% de contaminação para as raças M18-2, M12-2 e J1; 83% para C25, C75, e C24; 66% para KR01; 50% para M11-A; 33% para AS3, B106, M8 e M11 e 16% para as raças C211, E8 e Hindu. Todas as amostras de DNA amplificados das mariposas através da PCR multiplex apresentaram a banda de 721pb que comprova que o DNA amplificado era de B. mori e que não ocorreu nenhuma interferência na reação. A detecção de produtos de PCR de tamanho esperado (443pb) em ovos de indíviduos que estavam contaminados não foi conclusiva. Uma das hipóteses da dificuldade de detecção da contaminação por BmNPV em ovos pode ser oriunda à reduzida concentração do vírus na amostra. Esses resultados são promissores para a identificação de contaminação por BmNPV, evitando assim a proliferação deste em gerações subsequentes.
Palavras-chave	Bicho-da-seda; Bombyx mori nucleopolyhedrovirus; BmNPV; transmissão vertical
Title
Abstract	In the present work we reported the molecular detection with experimental breeds that belong to the Universidade Estadual de Maringá silkworm germplasm bank. The DNA extraction of moths of B. mori was done by routine methodology, and the DNA of six females of each breed (B82, M11-2, M18, C36, F6, M18-2, M12-2, J1, C25, C75, C24, KR01, M11-A, AS3, B106, M8, M11, C211, E8 and Hindu), formed individual pools gene. To obtain the amplified fragments, a pair of primers was designed based on specific sequence of the baculovirus genome corresponding to BmNPV ORF 14 and a pair of primers to silkworm Actin A3 gene segment. Of the twenty gene pools analyzed fifteen showed the band of approximately 443 bp that indicates the virus genome. Only the populations B82, M11-2, M18, C36 and F6 showed no contamination. The frequency of infected moths among the fifteen gene pools detected as contaminated was investigated by individual amplifications. The frequency of contaminated moths were: M18-2, M12 2-J1 had 100% of contamination, 83% to the C25, C75, C24 breeds, 66% to the KR01 breed, 50% to the M11-A, 33% to AS3, B106, M8 and M11 and 16% to the C21, Hindu and E8 breeds. All of the moths DNAs amplified by multiplex PCR showed a band of 721bp which shows that the DNA was amplified from B. mori. The detection of PCR products of the expected size (443pb) in infected individual’s eggs was not conclusive. One hypothesis of the difficulty in detecting contamination in the eggs BmNPV may arise from the low concentration of virus in the sample. These are promising results for the identification of contamination by BmNPV, thus preventing the proliferation thereof in subsequent generations. These are promising results for the identification of contamination by BmNPV, thus preventing virus proliferation in subsequent generations.
Key-words	Bombyx mori, Bombyx mori nucleopolyhedroviruses, BmNPV, vertical transmission.
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