Tese
Título	Indução de calos embriogênicos e regeneração de plantas em linhagens de milho-pipoca
Autor	Monezi Lucena, Ana Luisa
Unidade	Pós-Graduação em Genética e Melhoramento
Área de Concentração	Genética e Melhoramento
Orientador	Claudete Aparecida Mangolin
Co-Orientador(es)	Maria de Fátima Pires da Silva Machado Carlos Alberto Scapim.
Banca Examinadora	Adilson Ricken Schuelter Maria de Fátima Pires da Silva Machado Liriana Belizário Cantagalli Maria Auxiliadora Milaneze Gutierre
Data de Defesa	26/02/2014
Resumo	A técnica de cultura de tecido, a partir de células embriogênicas, tem sido um dos pré-requisitos para a obtenção de plantas geneticamente modificadas. Vários protocolos vêm sendo desenvolvidos para diferentes espécies, no entanto nenhum registro foi encontrado para milho-pipoca. No presente estudo, a proposta foi encontrar um ou mais de um protocolo de indução e regeneração de plantas desenvolvidas para o milho comum, e utilizá-los em linhagens de milho-pipoca. A capacidade de regeneração in vitro foi avaliada a partir de embriões imaturos coletados entre 12-20 dias após a polinização. Sete linhagens de milho-pipoca (P11, P12, P13, P15, P16, P18 e P20) foram avaliadas em três experimentos consecutivos. Para o processo de indução de calos foram testados, no primeiro experimento: dois tipos de meio de cultura (MS e N6), diferentes concentrações de 2,4-D (0,55; 1,1 e 2,2 mg•L-1) e duas concentrações de sacarose (3% e 6%). Nos dois últimos experimentos foram utilizados apenas um meio de indução e manutenção de calos contendo 2,2 mg•L-1 e 3% sacarose. No terceiro experimento manteve-se as quantidades de 2,4-D e sacarose, e foi adicionado um suplemento de caseína hidrolisada ao meio de indução, neste experimento foi incluída uma etapa adicional, denominada de maturação, em que os calos foram transferidos para o meio N6 contendo uma concentração aumentada de sacarose (6%). Para induzir e regenerar foram testados o meio N6 no primeiro ensaio e o meio MS nos demais, porém no último experimento adicionou-se a citocinina 6-BA, e a auxina IAA. Observamos que a indução de calos para as linhagens de milho-pipoca responde de maneira diferente de acordo com: 1) o tipo de meio de cultura e a concentração de 2,4-D; em meio N6 a concentração mais adequada foi a 2,2 mg•L-1 para as linhagens P12, P13, P16, P18 e P20; enquanto que em meio MS 1,1 mg•L-1 de 2,4-D foi melhor para as linhagens P12, P15 e P20; 2) época do ano em que a cultura é instalada, as linhagens P11, P12, P15 e P18 coletadas nos meses de junho e janeiro foram as que responderam melhor. A adição da fase de maturação favoreceu o desenvolvimento de calos nas linhagens P15 e P16 e a redução nas demais. A concentração de sacarose a 3% e a adição do suplemento caseína hidrolisada foram adequadas para o desenvolimento de calos para todas as linhagens. Somente as linhagens P11, P15 e P18, apresentaram potencial para formar brotos e regenerar plantas completas quando os calos foram transferidos e mantidos em meio MS de regeneração suplementado com IAA (0,5 mg•L-1) e 6-BA (1 mg•L-1), enquanto que a linhagem P12 apresentou tal potencial com e sem a presença dos referidos suplementos. O número maior de plantas aclimatadas foi obtido a partir dos calos da linhagem P15. Com o nosso estudo podemos concluir que as linhagens P11, P12, P15 e P18 podem ser as mais promissoras para utilização em programas envolvendo transformação genética de plantas de milho-pipoca.
Palavras-chave	Milho-pipoca, embriogênese somática e regeneração.
Title
Abstract	The technique of tissue culture from embryogenic cells, has been one of the prerequisites for obtaining genetically modified plants. Several protocols have been developed, however no records were found for popcorn. In the present study, the proposal was to find one or more of a protocol for induction and plant regeneration developed for regular corn and use it in strains of popcorn. The regeneration capacity was evaluated in vitro from immature embryos collected between 12-20 days after pollination. Seven strains of popcorn (P11, P12, P13, P15, P16, P18 and P20) were evaluated in three consecutive experiments. Were tested in the induction of callus in the first experiment, two types of medium MS and N6 culture, different concentrations of 2,4-D (0.55 , 1.1 and 2.2 mg • L -1) and two concentrations of sucrose ( 3% and 6%), in the last experiment : adding casein hydrolyzate and ripening stage. To induce regeneration was tested in the first test N6 medium and MS medium in the other, but in the last test was added to 6-BA cytokinin and auxin IAA. We observed that callus induction in strains of popcorn responds differently according to: 1) the type of culture medium and the concentration of 2,4-D; N6 medium in the most appropriate concentration was 2.2 mg • L- 1 for P12, P13, P16, P18 and P20 lineages, whereas MS medium 1.1 mg • L- 1 2,4-D was best for the P12 , P15 and P20 lineages, 2) time of year the crop is installed, the P11, P12, P15 and P18 strains collected in June and January were the ones that responded better; 4) the addition of the maturation phase that favored the development of calluses on strains P16, P15 and P18. Similar observations in all strains were checked for the concentration of 3% sucrose and the addition of casein hydrolyzate supplementation as appropriate for the developing callus. Four strains (P11, P12, P15, and P18) responded to the regeneration process and the use of growth regulators IAA (0.5 mg • L- 1) and 6 - BA (1 mg • L- 1) as well. The highest frequency of regeneration was observed in strains P12 and P15. The largest number of acclimated plants was obtained from callus of P15 lineage.
Key-words	Popcorn, somatic embryogenesis and regeneration
Arquivos	Nome Tamanho d-almlucena.pdf 0,00 KB

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