Tese
Título	Caracterização molecular de fitoplasmas do grupo 16SrIII e um novo fitoplasma do grupo 16SrVII em Vernonia brasiliana
Autor	Silva, Jaqueline Manzatti
Unidade	Pós-Graduação em Genética e Melhoramento
Área de Concentração	Genética e Melhoramento
Orientador	Prof. Dr. Eliezer Rodrigues de Souto
Co-Orientador(es)	Dauri José Tessmann
Banca Examinadora	Ivan Paulo Bedendo Claudete Aparecida Mangolin João Batista Vida Adriana Gonela Dauri José Tessmann
Data de Defesa	18/12/2014
Resumo	Fitoplasmas são procariotos sem parede celular e parasitas obrigatórios do floema, causadores de doenças em diversas culturas agronômicas. Plantas de Vernonia spp., família Asteraceae, com sintomas de clorose e superbrotamento foram encontradas em áreas de pastagens do município de Patos de Minas, Minas Gerais, e posteriormente, em plantas da mesma espécie, coletadas em pastagens de Piracicaba, São Paulo e de Maringá, Paraná. O objetivo do presente trabalho foi detectar e identificar se fitoplasmas estariam associados a estes sintomas. Assim, foram coletadas amostras de plantas de Vernonia spp. nos estados de São Paulo, Minas Gerais e Paraná. O DNA total das plantas foi submetido ao teste de duplo PCR empregando-se os pares de primers universais R16mF2/mR1 e R16F2n/R2 e primers específicos para identificação de fitoplasmas. Através do duplo PCR com os primers universais, foi possível detectar a constante presença de fitoplasmas nos tecidos das plantas, estando presentes em 42,66% das plantas coletadas. Com o uso de primers específicos foi possível demonstrar a ocorrência de fitoplasmas afiliados ao grupo 16SrIII. Análises de RFLP virtual, baseada na digestão enzimática da sequência nucleotídica do 16S rDNA, e análises filogenéticas, revelaram que os fitoplasmas detectados para o grupo 16SrIII seriam membros dos subgrupos 16SrIIII-B e 16SrIII-J. Também foi identificado um fitoplasma do grupo 16SrVII, que apresentou-se distinto dos subgrupos já descritos. Observações feitas ao microscópio eletrônico de varredura e de transmissão revelaram a presença de corpúsculos pleomórficos típicos de fitoplasmas no floema das plantas de Vernonia spp., confirmando a detecção por duplo PCR.
Palavras-chave	Vernonia, Asteraceae, duplo PCR, hospedeira alternativa,
Title
Abstract	Phytoplasmas are prokaryotes and phloem cell binding parasites, causing diseases to important agronomic crops. Plants of Vernonia spp., Asteraceae, with symptoms of chlorosis and witche’s broom were found in pastures of the city of Patos de Minas, Minas Gerais, and later, in plants of the same species, collected in pastures of Piracicaba, São Paulo and Maringa, Parana. The objective of this study was to detect and identify if phytoplasmas were associated with these symptoms. Thus, plant samples were collected from Vernonia spp., and total plant DNA was subjected to nested PCR tests employing pairs of universal primers R16mF2/mR1 and R16F2n/R2 and specific primers for identification of phytoplasmas. Base on PCR assays PCR with primers pair R16mF2/mR1 and R16F2n/R2 was possible to detect the constant presence of phytoplasmas in plant tissues, in 42.66% of collected samples. With phytoplasma specific primers was possible to demonstrate the occurrence of 16SrIII phytoplasma group members. Virtual RFLP analysis, based on the enzymatic digestion of the nucleotide sequences of 16S rDNA, and phylogenetic analyzes revealed that the phytoplasmas to 16SrIII group were affiliated with subgroups 16SrIIII-B and J-16SrIII. One phytoplasma was clustered among 16SrVII group members, which was distinct from other already described phytoplasm subgroups. Scanning and transmission electron microscopy revealed pleomorphic corpuscles in the phloem of Vernonia plants, confirming nested PCR detection of phytoplasms. Observations at the scanning electron microscope and transmission revealed the presence of typical pleomorphic corpuscles of phytoplasmas in the phloem of plants of Vernonia spp., confirming the detection by nested PCR.
Key-words	Vernonia, Asteraceae, Alternative hosts, Mollicutes, nested PCR
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