Quarta, 24 de abril de 2024.
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Dissertação
Título Análise do perfil proteômico do tecido gorduroso de lagartas de Bombyx mori L. (Lepidoptera: Bombycidae) inoculadas com nucleopolyhedrovirus (BmNPV)
Autor Gularte Chiarello, Alex Sandro
Unidade Pós-Graduação em Genética e Melhoramento
Área de Concentração Genética e Melhoramento
Orientador Maria Aparecida Fernandez
Co-Orientador(es) osé Luis da Conceição Silva and Dr. Flavio Augusto Vicente Seixas.
Banca Examinadora Flávio Augusto Vicente Seixas
José Luis da Conceição Silva
Data de Defesa 06/03/2015
Resumo O Bombyx mori L. ou bicho-da-seda como é popularmente conhecido, é um organismo de grande importância econômica para o homem desde a antiguidade. B. mori é um organismo modelo, no qual foram identificados vários genes para proteínas de defesa com atividade antimicrobiana. A detecção e sequenciamento de proteínas de defesa contra patógenos como o BmNPV, torna-se uma ferramenta para entendimento da biologia deste organismo e uma melhoria na criação e aumento do rendimento na produção de casulos, já que inúmeros prejuízos estão ligados à infecção por agentes patogênicos. O BmNPV é o vírus causador dos maiores prejuízos para os sericicultores por alterar diversas características fisiológicas do animal ao longo da infecção. A presença do vírus desencadeia uma cascata de reações metabólicas que tem como finalidade eliminar a multiplicação viral e migração do vírus para tecidos adjacentes. O corpo gorduroso é o principal sítio de síntese de proteínas de defesa contra microrganismos nos insetos, deste modo, pesquisas empregando ferramentas proteômicas em lagartas inoculadas com o BmNPV podem revelar o estado da expressão gênica nas condições fisiológicas específicas durante o processo infeccioso no corpo gorduroso. O presente estudo teve por objetivo identificar diferenças no padrão de expressão de proteínas em lagartas infectadas do sétimo e oitavo dia do 5º instar e verificar se as mesmas estão relacionadas ao processo de autodefesa. As proteínas totais extraídas do corpo gorduroso foram analisadas por eletroforese 2-DE e foi realizado o sequenciamento dos fragmentos trípticos por espectrometria de massas (MALDI/TOF-TOF) de alguns spots diferencialmente expressos. Os resultados obtidos apontam para uma diferença no padrão de expressão de proteínas de lagartas inoculadas com o BmNPV quando comparados a amostras do tecido gorduroso de lagartas controle, durante o desenvolvimento normal do lepidóptero. Dos onze spots excisados do gel 2-DE e tripsinizados, somente três foram identificados: spot CGBMI741 amostra 7ºDPI identificado como 97394, o spot CGBMC844 amostra oitavo dia controle identificado como 81849 (controle) e CGBMI841 amostra oitavo dia infectado identificado como 81850 (8º DPI). As proteínas analisadas nesse trabalho, provavelmente estão envolvidas em funções metabólicas nas células do corpo gorduroso, entretanto, o envolvimento dessas proteínas no sistema imune de Bombyx mori, não pode ser identificado.

Palavras-chave Proteôma, Resposta imune, Nucleopolyhedrovirus.
Title
Abstract The Bombyx mori L. or silkworm silk as it is popularly known, is a body of great economic importance to man since antiquity. B. mori is a model organism in which several genes have been identified for defense proteins with antimicrobial activity. The detection and sequencing of proteins for defense against pathogens such as BmNPV becomes a tool for understanding the biology of the organism and an improvement in breeding and increased yields in cocoons, because many losses are associated with infection by pathogens. BmNPV is the virus of the biggest losses for sericicultores to change various physiological characteristics of the animal throughout infection. The presence of the virus triggers a cascade of metabolic reactions aimed at eliminating viral multiplication and migration of the virus to adjacent tissue. The fat body is the main site of synthesis of defense against microorganism’s proteins in insects, thus employing proteomic research tools crawlers inoculated with BmNPV can reveal the state of gene expression in specific physiological conditions during the infectious process in the fat body. This study aimed to identify differences in the pattern of protein expression in infected larvae of the seventh and eighth day of the 5th instar and verify that they are related to the process of self-defense. The extracted fat body total protein were analyzed by 2-DE and electrophoresis was carried sequencing of tryptic fragments by mass spectrometry (MALDI / TOF-TOF) of some differentially expressed spots. The results point to a difference in the expression pattern of larvae inoculated with BmNPV proteins when compared to the fat tissue samples of caterpillar control during normal lepidopteran development. Of the eleven spots excised from the gel 2-DE and trypsinized, only three were identified: spot CGBMI741 sample 7ºDPI identified as 97 394, the spot CGBMC844 sample eighth day control identified as 81,849 (control) and CGBMI841 sample infected eighth day identified as 81850 (8 DPI ). The proteins analyzed in this work, are probably involved in metabolic functions in the cells of the fat body, however, the involvement of these proteins in the immune system of Bombyx mori, can not be identified.

Key-words Proteome, Immune response, Nucleopolyhedrovirus.
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