Terça, 18 de junho de 2024.
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Dissertação
Título Análise do perfil proteômico do tecido gorduroso de lagartas de Bombyx mori L. (Lepidoptera: Bombycidae) inoculadas com nucleopolyhedrovirus (BmNPV)
Autor Alex Sandro Gularte, Chiarello
Unidade Pós-Graduação em Genética e Melhoramento
Área de Concentração Genética e Melhoramento
Orientador Maria Aparecida Fernandez
Co-Orientador(es) José Luis da Conceição Silva e Flavio Augusto Vicente Seixas
Banca Examinadora José Luis da Conceição Silva
Flávio Augusto Vicente Seixas
Data de Defesa 12/09/2016
Resumo Bombyx mori L. ou bicho-da-seda como é popularmente conhecido é um organismo de grande importância econômica para o homem desde a antiguidade. Trata-se de um organismo modelo, no qual foram identificados vários genes para proteínas de defesa com atividade antimicrobiana. A detecção e sequenciamento de proteínas de defesa contra patógenos, como o BmNPV, torna-se uma ferramenta para entendimento da biologia deste organismo e uma melhoria na criação e aumento do rendimento na produção de casulos, uma vez que inúmeros prejuízos estão ligados à infecção por agentes patogênicos. O BmNPV é o vírus causador dos maiores prejuízos para os sericicultores, por alterar diversas características fisiológicas do animal ao longo da infecção. A presença do vírus desencadeia uma cascata de reações metabólicas, cuja finalidade é eliminar a multiplicação viral e a migração do vírus para tecidos adjacentes. O corpo gorduroso é o principal sítio de síntese de proteínas de defesa contra microrganismos nos insetos e, por isso, pesquisas, empregando ferramentas proteômicas em lagartas inoculadas com o BmNPV, podem revelar o estado da expressão gênica nas condições fisiológicas específicas durante o processo infeccioso no corpo gorduroso. No presente estudo, o objetivo foi identificar diferenças no padrão de expressão de proteínas em lagartas infectadas, do sétimo e oitavo dia do 5º ínstar e verificar se as mesmas estão relacionadas ao processo de autodefesa e também sequenciar a proteína kin 17, com base em referências bibliográficas sobre o ponto isoelétrico e o peso molecular. As proteínas totais extraídas do corpo gorduroso foram analisadas por eletroforese 2-DE e foi realizado o sequenciamento dos fragmentos trípticos por espectrometria de massas (MALDI/TOF-TOF) de alguns spots diferencialmente expressos. Os resultados obtidos apontam para uma diferença no padrão de expressão de proteínas de lagartas inoculadas com o BmNPV quando comparados a amostras do tecido gorduroso de lagartas controle, durante o desenvolvimento normal do lepidóptero. Dos onze spots recortados do gel 2-DE e tripsinizados, somente três foram identificados: o spot número 6, amostra 7º DPI, identificado como fator de elongação 1-alpha; o spot 8, amostra do oitavo dia controle, identificado como fator de crescimento disco imaginal; e o spot 11, amostra 8º DPI, identificado como proteína não caracterizada de B. mori. As proteínas analisadas nesse trabalho, provavelmente, estão envolvidas em funções metabólicas nas células do corpo gorduroso. Entretanto, o envolvimento dessas proteínas no sistema imune de Bombyx mori não pode ser determinado.
Palavras-chave Proteôma, resposta imune, nucleopolyhedrovirus
Title
Abstract Bombyx mori L. or silkworm silk as it is popularly known is a body of great economic importance to man since antiquity. B. mori is a model organism in which several genes have been identified for defense proteins with antimicrobial activity. The detection and sequencing of proteins for defense against pathogens such as BmNPV becomes a tool for understanding the biology of the organism and an improvement in breeding and increased yields in cocoons, because many losses are associated with infection by pathogens. BmNPV is the virus of the biggest losses for sericicultores to change various physiological characteristics of the animal throughout infection. The presence of the virus triggers a cascade of metabolic reactions that are intended to eliminate the virus multiplication and migration of the virus to adjacent tissue. The fat body is the main site of synthesis of defense against microorganism’s proteins in insects, thus employing proteomic research tools crawlers inoculated with BmNPV can reveal the state of gene expression in specific physiological conditions during the infectious process in the fat body. This study aimed to identify differences in the pattern of protein expression in infected larvae of the seventh and eighth day of the 5th ínstar and verify that they are related to self-defense process and also sequence the protein kin 17 based on references on the isoelectric point and molecular weight. The extracted fat body total protein were analyzed by 2-DE and electrophoresis was carried sequencing of tryptic fragments by mass spectrometry (MALDI / TOF-TOF) of some differentially expressed spots. The results point to a difference in the expression pattern of larvae inoculated with BmNPV proteins when compared to the fat tissue samples of caterpillar control during normal lepidopteran development. Of the eleven cut spots in the gel 2-DE and trypsinized, only three were identified: number 6 spot sample 7ºDPI identified as elongation factor 1-alpha, the spot 8, the eighth day control sample identified factor imaginal disc growth and the spot 11, sample 8 DPI identified a non-characterized protein of B. mori. Proteins analyzed in this study are probably involved in metabolic functions in the cells of the fat body, however, the involvement of these proteins in the immune system of Bombyx mori can not be determined.


Key-words Proteome, immune response, nucleopolyhedrovirus.
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