Dissertação
Título	Toxicidade, análise genética e identificação de uma nova esterase após contaminação de abelhas Scaptotrigona bipunctata Lepeletier, 1836 (Hymenoptera:Apidae) com concentrações subletais do inseticida natural azadiractina
Autor	Pereira, Eloísa Magalhães
Unidade	Pós-Graduação em Genética e Melhoramento
Área de Concentração	Genética e Melhoramento
Orientador	Maria Claudia Colla Ruvolo Takasusuki
Co-Orientador(es)	Claudete Aparecida Mangolin Maria de Fátima Pires Machado da Silva.
Banca Examinadora	Maria Claudia Colla Ruvolo Takasusuki Ana Silvia Lapenta, Ludimilla Ronqui
Data de Defesa	20/02/2018
Resumo	As abelhas sem ferrão ocorrem em grande parte das regiões tropicais, ocupando praticamente toda a América Latina e África, além do sudeste asiático e norte da Austrália. Contudo, é nas Américas que ocorre grande parte dessa diversidade. Estas abelhas desempenham importantes papéis na polinização, na manutenção dos ecossistemas e no aumento da produtividade na agricultura. O controle de diversas pragas na agricultura tem sido feito com o uso de agrotóxicos. Apesar de sua significativa contribuição para a produção agrícola, o uso intensivo e indiscriminado desses produtos químicos causam prejuízos para a agricultura e meio ambiente decorrentes da morte de insetos polinizadores, sendo essa, uma das possíveis causas relacionadas à diminuição das populações de abelhas. Nos inúmeros grupos de inseticidas podemos citar os reguladores de crescimento. Dentre eles o Azamax®, com seu princípio ativo azadiractina, extraído das sementes da árvore de nim (Azadirachta indica A. Juss), é amplamente empregado(s) para o controle de larvas, atividade fagoinibidora, além de interferir no funcionamento das glândulas endócrinas que controlam a metamorfose dos insetos, impedindo o desenvolvimento na fase larval. No entanto, podem apresentar efeitos indiretos a organismos não-alvo, entre eles os polinizadores como as abelhas. O objetivo deste presente trabalho foi avaliar, o efeito do inseticida regulador de crescimento Azamax® sobre a mortalidade, os efeitos da exposição à concentrações subletais, como alteração da expressão das isoenzimas esterases e a estrutura da cromatina em abelhas S. bipunctata. Operárias adultas foram coletadas na entrada de caixas comerciais e então contaminadas por contato e ingestão por 24, 48 e 72 horas de exposição em diferentes concentrações subletais do inseticida Azamax®. Houve correlação entre a mortalidade e a concentração de Azamax® após contaminação por ingestão. A contaminação por ingestão promoveu inibição parcial na atividade relativa das EST-1, EST-4 e EST-5. A contaminação por ingestão após 24 ou 48 horas com Azamax dependendo da concentração empregada ocorreu a detecção de uma nova esterase a EST-6, uma beta-esterase. Ou seja, dependendo da concentração subletal utilizada há a ativação de um gene de esterase que possivelmente atua na detoxificação do organismo dessas abelhas. A análise citoquímica permitiu observar que houve alterações na estrutura da cromatina dos túbulos de Malpighi e intestino médio, nos diferentes tempos de exposição e de concentração do inseticida, tanto por contato quanto por ingestão, quando comparados ao controle. As análises de CEC sugerem que há descondensação da cromatina, alterando a expressão gênica. A contaminação com o inseticida natural Azamax®, que contém o princípio ativo azadiractina, pode causar alterações em nível molecular em abelhas S. bipunctata, ocorrendo a síntese da EST-6 e descondensação da cromatina, que em longo prazo pode alterar a viabilidade dessas abelhas.
Palavras-chave	Abelha sem ferrão; Esterases; Cromatina
Title
Abstract	The stingless bees occur in all of Latin America and Africa, as well as southeast Asia and northern Australia. These bees play important roles in pollination, in maintaining ecosystems and increasing productivity in agriculture. The control of several pests in agriculture has been done basically with the use of insecticides. In spite of its significant contribution to agricultural production, the intensive and indiscriminate use of these products cause damage to agriculture and the environment due to the death of pollinating insects. This is one of the possible causes related to the reduction of bee populations. In the numerous groups of insecticides we can mention the growth regulators. Among them Azamax®, with its active principle azadirachtin, extracted from the seeds of the neem tree (Azadirachta indica A. Juss), is widely used for the control of larvae, feed inhibition activity, and interfering in the endocrine glands that control the metamorphosis, preventing development in the larval phase. However, indirect effects on non-target organisms may occur, including pollinators such as bees. This work evaluate the effect of growth regulating insecticide on mortality and the effects of exposure to sublethal concentrations, such as alteration of isoenzyme esterases and chromatin structure in S. bipunctata, after contamination by ingestion and contact with the insecticide Azamax®. Adult worker bees were collected at the entrance of hives and then contaminated by contact and ingestion for 24, 48 and 72 hours of exposure in different sublethal concentrations of the insecticide Azamax®. There was a correlation between mortality and Azamax® concentration after contamination by ingestion. Contamination by ingestion promoted partial inhibition in the relative activity of EST-1, EST-4 and EST-5. Contamination by ingestion after 24 or 48 hours detected a new esterase, the EST-6, a beta-esterase, in some concentrations. There is an activation of an esterase gene that possibly acts on the detoxification of these bees depending on the sublethal concentration. The cytochemical analysis allowed to observe changes in the chromatin structure of the Malpighi and midgut tubules, in the different exposure times and concentration, both by contact and by ingestion. The CEC analyzes suggest that there is chromatin decondensation, altering the gene expression. The contamination with Azamax®, may cause molecular changes in S. bipunctata bees, with the synthesis of EST-6 and chromatin decondensation, which in the long term may alter the viability of these bees.
Key-words	Stingless bees; Esterases; Chromatin
Arquivos	Nome Tamanho indisponivel.pdf 18,59 KB

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