Terça, 05 de março de 2024.
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Dissertação
Título Polimorfismo de comprimento de fragmentos “D-Loop” de “Serrasalmus maculatus” Kner 1858 (Pisces, Serrasalminae) das bacias do alto Paraná, alto Paraguai e Tocantins
Autor Bignotto, Thaís Souto
Unidade Pós-Graduação em Genética e Melhoramento
Área de Concentração Genética e Melhoramento
Orientador Prof. Dr. Alberto José Prioli
Co-Orientador(es) Prof. Dr. Horácio Ferreira Júlio Júnior
Profª Drª Sônia Maria Alves Pinto Prioli
Banca Examinadora Prof. Dr. Alberto José Prioli
Prof. Dr. Horácio Ferreira Júlio Júnior
Profª Drª Alessandra Valéria de Oliveira
Data de Defesa 27/11/2006
Resumo "Serrasalmus maculatus" (Kner, 1858) é popularmente conhecida como piranha ou pirambeba e pertence à subfamília Serrasalminae (Família Characidae). Esta espécie é considerada não propriamente migradora, apresentando ampla distribuição geográfica, incluindo as bacias dos rios Paraguai, Paraná e Amazônica. Antes da construção da barragem de Itaipu em 1985, "S. maculatus" era a única espécie encontrada no alto rio Paraná. Em decorrência da formação do reservatório que inundou os Saltos de Sete Quedas, os indivíduos de "S. maculatus" da população a jusante de Sete Quedas foram incorporados à população do alto rio Paraná. Na bacia Paraguai-Paraná foram relatados a presenças de três citótipos, evidenciando variações intraespecíficas em "S. maculatus". O objetivo deste trabalho foi avaliar a ocorrência de polimorfismo de comprimento de fragmentos "D-loop" do DNA mitocondrial e do espaçador intergênico não-transcrito NTS do DNA ribossômico 5S, dentro e entre populações de "S. maculatus" das bacias do alto rio Paraná, alto rio Paraguai e Tocantins. O DNA genômico total de 18 espécimes foi extraído com protocolo com base em fenol-clorofórmio e amplificado com os pares de "primers D-loop" L e H16498, e 5S-A e 5S-B, que amplificam seqüências do mtDNA e da região NTS do rDNA 5S, respectivamente. Os comprimentos dos fragmentos amplificados foram determinados em gel de agarose 1% ou 1,4%, por comparação com o marcador "Ladder" 100 pb. Variações no comprimento de fragmentos da região "D-loop" de "S. maculatus" foram encontradas tanto dentro quanto entre as populações de peixes. Entre os indivíduos da bacia do rio Tocantins, não foi verificado polimorfismo de tamanho de fragmentos "D-loop", os quais amplificaram um segmento de aproximadamente 550 pb. Na população do rio Manso foram identificados três grupos, com fragmentos amplificados de aproximadamente 580, 600 e 620 pb. Na planície de inundação do alto rio Paraná foram detectados fragmentos com 580, 600 e 650 pb. Entretanto, a amplificação dos segmentos NTS do rDNA 5S revelou um padrão de idêntico entre os indivíduos das diferentes populações, não representando um marcador útil na verificação de variações intraespecíficas nesta espécie de peixe. Como "S. maculatus" possui ampla distribuição geográfica, seria esperado que populações distantes, ou de bacias diferentes, apresentassem polimorfismo molecular. O seqüenciamento dos fragmentos "D-loop" permitirá revelar as causas desse polimorfismo e ainda indicar, com maior segurança, se as populações do alto rio Paraná, do alto rio Paraguai e do rio Tocantins pertencem à espécie "S. maculatus".
Palavras-chave Diversidade genética, DNA mitocondrial, DNA ribossômico 5S,
Title Length polymorphism of D-loop fragments of Serrasalmus maculatus Kner 1858 (Pisces, Serrasalminae) from upper Paraná, upper Paraguai and Tocantins basins.
Abstract Serrasalmus maculatus (Kner, 1858) belong to the subfamily Serrasalminae (Family Characidae) and is commonly known as piranha or pirambeba. It is considered non migrant specie, typically found in slowness waters, occurring at the Paraguai, Paraná and Amazon basins. S. maculatus was the only species of piranha found in the Upper Paraná before the Itaipu dam construction. Due Itaipu reservoir impounding in 1982, Seven Falls were flooded, and 150 km of the Middle Paraná River basin, downstream falls, were merged to the Upper Paraná. As result, population of S. maculatus down to Seven Falls was incorporated to the Paraguai-Paraná basin, giving evidence of intraspecific variations in S. maculatus. The objective of this work was to investigate length polymorphism of the mitochondrial DNA D-loop fragments and the ribosomal DNA 5S non transcribed spacers (NTS), between and inside the S. maculatus population of the Paraná, Paraguai and Tocantins rivers basins. Total genomic DNA of 18 specimens was extract with a protocol based of fenol-cloroform. The primers D-loop L and H16498, and 5S-A and 5S-B, were used to amplify segments of the mtDNA and the region NTS rDNA 5S, respectively. The fragments length amplified were determined in agarose gel 1% or 1.4%, by comparing with Ladder 100 bp (Invitrogen). There were found variations fragments length of D-loop region inside and between S. maculatus populations. Specimens from Tocantins amplified a segment of 550bp, and detected no length polymorphism of the D-loop region. Three groups were identified at the Manso river population; with fragments around of 580, 600 and 620 bp. Fragments of 580, 600 and 650 bp were detected in the Paraná river floodplain population. However, sequence NTS of the rDNA 5S showed no variation among populations, and therefore, it was not an efficient marker to the polymorphism detection in this fish specie. Once S. maculatus presents a wide geographic distribution, it would be expected that distant populations, or populations of different basins, show molecular polymorphism. Further analysis, like the D-loop fragments sequencing, must be undertaken to verify the nature of the polymorphism and to confirm the S. maculatus specie presence in all the studied basins.
Key-words Genetic diversity, Mitochondrial DNA, Ribosomal DNA 5S,
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