Dissertação
Título	Validação de genótipos resistentes à doença azul do algodoeiro por marcadores moleculares SNPs associados ao gene de resistência Cbd (Cotton blue disease)
Autor	Fiorentin, Francis Junior Rigo
Unidade	Pós-Graduação em Genética e Melhoramento
Área de Concentração	Genética e Melhoramento
Orientador	Eliezer Rodrigues de Souto
Co-Orientador(es)	Adriana Gonela Claudete Aparecida Mangolin
Banca Examinadora	Taise Bijora Adriana Gonela
Data de Defesa	30/01/2022
Resumo	A cultura do algodão (Gossypium hirsutum) apresenta, mundialmente, uma grande importância econômica, sendo utilizado principalmente na indústria têxtil. O Brasil tem se mantido entre os cinco maiores produtores mundiais, figurando também entre os maiores exportadores. Alguns fatores têm levado a perdas significativas de produtividade, destacando-se a doença azul do algodoeiro, associada ao Cotton leafroll dwarf virus (CLRDV), como uma das mais importantes, comprometendo a produção e a qualidade da fibra produzida. Experimentalmente, o CLRDV é transmitido para o algodoeiro pelo pulgão Aphis gossypii (vetor) e/ou por meio do método de agroinfiltração a vácuo, o que dificulta estudos das interações planta/patógeno e a avaliação de cultivares na busca por resistência à doença. Neste contexto, o objetivo do presente trabalho foi utilizar os marcadores moleculares SNPs, associados ao gene de resistência Cbd, para avaliar e validar genótipos identificados como resistentes à doença azul do algodoeiro. A etapa inicial consistiu na validação in silico dos marcadores SNPs NG0203671, NG0204310, NG0211495 e NG0203481 para verificar sua especificidade ao gene de resistência. Após, foi realizada a validação dos loci SNPs via PCR, em plantas de algodoeiro. Posteriormente, foi conduzida a genotipagem de 31 genótipos de algodoeiro que apresentaram diferentes reações aos clones típico e atípico do vírus CLRDVpara verificar se os marcadores SNPs selecionados segregavam com o gene de resistência Cbd. Com base nos resultados obtidos foi possível verificar que três loci (NG0203671, NG0204310 e NG0203481) apresentaram os amplicons associados ao geneCbd. Os marcadores apresentaram eficiências de 55% e 50% na identificação de genótipos resistentes, respectivamente, aos clones típico e atípico. O produto da amplificação obtido no locusNG0203671 foi enviado para sequenciamento, para comprovação da identidade do amplicon. A sequência obtida foi submetida ao alinhamento utilizando Nucleotide BLAST – NCBI com a sequência GU265861, demonstrando que o amplicon obtido no locusNG0203671 corresponde a sequência genômica associada ao gene Cbd. Portanto, conclui-se que os marcadores NG0203671, NG0204310 e NG0203481 são eficientes na identificação de genótipos resistentes às formas típica e atípica do Cotton leafroll dwarf vírus.
Palavras-chave	Gossypiumhirsutum, Cbd, SNPs.
Title
Abstract	Cotton (Gossypium hirsutum) is of great economic importance worldwide, being used mainly in the textile industry. Brazil has remained among the five largest producers in the world, being also among the largest exporters. Some factors have led to significant productivity losses, highlighting the blue cotton disease, associated with Cotton leafroll dwarf virus (CLRDV), as one of the most important, compromising the production and quality of the fiber produced. Experimentally, CLRDV is transmitted to cotton by the aphid Aphis gossypii (vector) and/or by means of the vacuum agroleakage method, which makes it difficult to study plant/pathogen interactions and evaluate cultivars in the search for resistance to the disease. In this context, the objective of the present work was to use molecular markers SNPs, associated with the Cbd resistance gene, to evaluate and validate genotypes identified as resistant to blue cotton disease. The initial step consisted of in silico validation of SNP markers NG0203671, NG0204310, NG0211495 and NG0203481 to verify their specificity to the resistance gene. Afterwards, the validation of the SNPs loci was carried out via PCR, in cotton plants.Subsequently, genotyping of 31 cotton genotypes that showed different reactions to typical and atypical clones of the CLRDV virus was carried out to verify whether the selected SNP markers segregated with the Cbd resistance gene. Based on the results obtained, it was possible to verify that three loci (NG0203671, NG0204310 and NG0203481) presented the amplicons associated with the Cbd gene. The markers showed efficiencies of 55% and 50% in the identification of resistant genotypes, respectively, to typical and atypical clones. The amplification product obtained at locus NG0203671 was sent for sequencing to prove the identity of the amplicon. The sequence obtained was submitted to alignment using Nucleotide BLAST - NCBI with the sequence GU265861, demonstrating that the amplicon obtained at locus NG0203671 corresponds to the genomic sequence associated with the Cbd gene. Therefore, it is concluded that the markers NG0203671, NG0204310 and NG0203481 are efficient in the identification of genotypes resistant to the typical and atypical forms of the Cotton leafroll dwarf virus.
Key-words	Gossypiumhirsutum, Cbd, SNPs.
Arquivos	Nome Tamanho indisponivel.pdf 18,59 KB

TESES E DISSERTAÇÕES - Universidade Estadual de Maringá
Desenvolvimento: VIASITE INTERNET