Terça, 28 de maio de 2024.
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Tese
Título Influência de fatores na expressão do marcador R-navajo e uso de Ft Raman na identificação de haploides verdadeiros em milho
Autor Rosa, Jocimar Costa
Unidade Pós-Graduação em Genética e Melhoramento
Área de Concentração Genética e Melhoramento
Orientador Carlos Alberto Scapim
Co-Orientador(es) indisponível
Banca Examinadora Marcos Ventura Faria
Adilson Ricken Schuelter
Hugo Zeni Neto
Robson Marcelo Rossi
Data de Defesa 16/08/2022
Resumo O uso de indutores de haploidia seguido da duplicação cromossômica é caracterizado como importante ferramenta no melhoramento vegetal. Por meio dessas técnicas, é possível gerar linhagens em menor tempo e custo inferior em comparação à metodologia tradicional. Uma das principais limitações da produção de linhagens duplo-haploides in vivo está na identificação de haploides com baixa frequência de falsos positivos e no desenvolvimento de indutores com alta taxa de indução. Na literatura é possível encontrar diversas metodologias destinadas à identificação de haplóides, dentre elas a citometria de fluxo, o uso de marcadores moleculares e o gold stand. Entretanto ainda há espaço para outros métodos, pouco explorados nesse segmento, que diferente dos demais podem permitir a identificação de haploides ainda nas sementes e de forma não destrutiva. A espectroscopia Raman é uma técnica muito conhecida em estudos relacionados a características físicas de objetos inclusive com trabalhos evidenciando a quantificação de DNA. Essa técnica investiga os constituintes moleculares e estruturais das amostras e permite detectar modificações físicas, bioquímicas e moleculares. O presente trabalho teve por objetivo obter sementes possivelmente haploides por meio do cruzamento de híbridos com os indutores TAIL 8 e KHI, buscando formas eficientes de confirmação de haploidia por meio do FT Raman além de predizer as melhores combinações de fatores para aumento da taxa de sucesso na obtenção de haploides. Sementes possivelmente haploides obtidas por meio de cruzamento in vivo com os indutores TAIL 8 e KHI, caracterizadas quanto à haploidia por meio do marcador fenotípico R-navajo, foram submetidas à confirmação da haploidia por meio de assinatura espectral relacionada ao comprimento de ondas e citometria de fluxo. Estas metodologias foram comparadas quanto à eficiência em caracterizar a haploidia. A regressão logística foi utilizada na predição da melhor combinação dos fatores para obtenção de haploides.
Palavras-chave Zea mays L., R-navajo, resgate de embriões
Title
Abstract The use of haploid inducers followed by chromosome duplication is characterized as an important tool in plant improvement. Through these techniques, it is possible to generate lines in less time and at a lower cost compared to the traditional methodology. One of the main limitations of the production of double-haploid strains in vivo is the identification of haploids with a low frequency of false positives and the development of inducers with a high induction rate. In the literature, it is possible to find several methodologies aimed at identifying haploids, including flow cytometry, the use of molecular markers and the gold stand. However, there is still room for other methods, little explored in this segment, which, unlike the others, can allow the identification of haploids still in seeds and in a non-destructive way. Raman spectroscopy is a well-known technique in studies related to physical characteristics of objects, including works showing the quantification of DNA. This technique investigates the molecular and structural constituents of samples and allows the detection of physical, biochemical and molecular changes. The present work aimed to obtain possibly haploid seeds by crossing hybrids with the TAIL 8 and KHI inducers, seeking efficient ways to confirm haploidy through the FT Raman, in addition to predicting the best combinations of factors to increase the success rate in obtaining haploids. Possibly haploid seeds obtained by in vivo crossing with TAIL 8 and KHI inducers, characterized for haploidy by means of the phenotypic marker R-navajo, were submitted to confirmation of haploidy by means of a spectral signature related to wavelength and cytometry of flow. These methodologies were compared for efficiency in characterizing haploidy. Logistic regression was used to predict the best combination of factors to obtain haploids.
Key-words Zea mays L., R-Navajo, R-Navajo,
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